实时荧光定量PCR检测常见问题
日期:2018-07-05
问题 | 可能原因 | 解决办法 |
实时荧光定量PCR 实验无CT 值出现或无扩增信号 | 实验的循环数不够 | 设置的循环数应该在35 以上,最多可增加至45 个循环 |
通道选择不正确 | 根据说明书的要求选择采光通道 | |
荧光采集位置设置有误 | 根据说明书的要求设置荧光信号采集位置 | |
引物保存方式不恰当 | 向经销商申请重新发送引物探针验证 | |
模板量不足 | 增大模板的加入量 | |
模板降解 | 优化RNA提取方法/使用RNA提取试剂盒 | |
加入样品中存在PCR 抑制物 | 提高样本纯度,排除干扰 | |
PCR 仪器故障 | 联系仪器工程师排除 | |
实验中出现阴性抬头及其解决方案 | 实验室气溶胶污染 | 在实验操作过程中严防气溶胶的产生 |
标本交叉污染 | 规范实验操作 | |
移液器使用引起的交叉污染 | 通过使用带滤芯吸头和规范移液器使用方法 | |
实验结果重复性差 | 实验操作过程中加样不准确 | 加大试剂配置体系 |
有液体吸附在管壁上 | 加样完成后瞬时离心 | |
荧光定量PCR 仪孔间温度不一致或孔间升降温不一致 | 更换荧光定量PCR仪 | |
模板浓度过低 | 提高模板浓度 |